PGC1β通过调控线粒体氧化应激信号通路促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活化的机制研究
项目来源
广（略）技（略）
项目主持人
戴（略）
项目受资助机构
中（略）
项目编号
2（略）A（略）3（略）7（略）
立项年度
2（略）
立项时间
未（略）
研究期限
未（略） （略）
项目级别
省（略）
受资助金额
1（略）0（略）
学科
临（略）
学科代码
未（略）
基金类别
广（略）然（略）金（略）项（略）
关键词
类（略）节（略） （略）样（略）胞（略）P（略）β（略）r（略）m（略）i（略）r（略）i（略） （略）i（略）b（略）t（略）k（略）y（略）i（略）t（略）
参与者
马（略）荆（略）
参与机构
未（略）
项目标书摘要：成纤（略）活化出现异常迁移和（略）(rheumato（略）s,RA)关节炎症（略）前期报道,RA-F（略）体增殖物激活受体γ（略）)可促进RA-FL（略）-α、IL-6、I（略）酶(MMP)-3、（略）L,抑制RA-FL（略）临床病理学研究发现（略）里层及衬里下层多种（略）滑膜PGC1β表达（略）平、关节破坏程度呈（略）GC1β可能参与R（略）进一步体外培养原代（略）染RA-FLS沉默（略）通过划痕实验、体外（略）迁移和Matrig（略）nswell小室侵（略）、Western （略）检测发现,PGC1（略）TPase促进RA（略）伪足的形成进而促进（略）探针DCFH-DA（略）,RA-FLS中R（略）关节病患者的FLS（略）1β的同时，加入N（略）)抑制ROS生成或（略）)促进ROS生成，（略） ROS水平促进 （略）。Western （略）1β可能通过上调R（略）通路发挥调控作用。（略）模型NCG小鼠建立（略）袭模型，证实PGC（略）FLS侵袭软骨。本（略）外及体内实验的角度（略）RA滑膜炎症及关节（略）并从免疫代谢的崭新（略）β通过调控能量代谢（略）具体调控机制，为今（略）供新靶点。
Applicati（略）: Activat（略）oblast-li（略）ytes(FLS)（略）sequent e（略）gration a（略） cause sy（略） joint de（略）n rheumat（略）is(RA).We（略） reported（略）ted trans（略）ctor pero（略）iferator-（略）eceptor g（略）vator(PGC（略）LS promot（略）etion of （略）IL-8,MMP-（略）d RANKL,a（略）d apoptos（略）S.In this（略）urther fo（略）was expre（略） nuclei o（略）noviocyte（略） inflamma（略）and vascu（略）lial cell（略）ovium.Syn（略）β was pos（略）ociated w（略）nd system（略）tion as w（略）t destruc（略）implied t（略）ight invo（略）pathogene（略）vitis and（略）ruction i（略）ro,PGC1β （略）wn or ove（略）by transf（略）entivirus（略）Wound hea（略）transwell（略）and invas（略）showed th（略）omoted th（略） and inva（略）FLS.Weste（略） G-LISA a（略）d that PG（略）ed Rho GT（略）ity.F-act（略） showed t（略）increased（略）ffling la（略）and filop（略） leading （略）-FLS.Furt（略）DA using （略）try showe（略）mean leve（略）n RA-FLS （略） than tha（略）-FLS,whil（略）regulated（略）of ROS in（略）ernumerar（略）d reverse（略）tory effe（略） knockdow（略）ion and i（略）RA-FLS.On（略）ry,NAC co（略） the faci（略）fect of P（略）pression （略）essive ab（略）-FLS,sugg（略） the regu（略） of PGC1β（略）t in part（略）e ROS pat（略）n blot sh（略）GC1β prom（略）pression （略）5 and NF-（略） vivo stu（略）ransfecte（略） knockdow（略）anted int（略）s of NCG （略）exhibited（略）ant reduc（略）asion int（略） with sig（略）lower inv（略）.This stu（略）he critic（略）PGC1β on （略）ynovitis （略）estructio（略） clarifie（略）nism of P（略）ulating m（略）l oxidati（略）ylation p（略）rder to d（略）w therape（略） for RA.
项目受资助省
广（略）
1.PGC1β通过调控线粒体氧化应激信号通路促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞活化的机制研究结题报告(Mechanism of PGC1β on activating rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes through regulating mitochondrial oxidative phosphorylation pathway)
- 关键词：
- 类风湿关节炎、成纤维样滑膜细胞、PGC1β、rheumatoid arthritis、fibroblast-like synoviocytes、PGC1β
- 马剑达；荆俊；戴冽；
- 《中山大学；》
- 2020年
- 报告
成纤维样滑膜细胞(FLS)活化出现异常迁移和侵袭是造成类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)关节炎症及破坏的重要原因。我们前期报道,RA-FLS高表达的过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子(PGC1β)可促进RA-FLS分泌炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-8)、基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13及RANKL,抑制RA-FLS凋亡。本研究首先通过临床病理学研究发现PGC1β在RA滑膜衬里层及衬里下层多种细胞的胞核中表达,RA滑膜PGC1β表达与滑膜局部及全身炎症水平、关节破坏程度呈正相关，提示RA滑膜PGC1β可能参与RA滑膜炎症及关节破坏。进一步体外培养原代RA-FLS,慢病毒转染RA-FLS沉默或上调PGC1β表达，通过划痕实验、体外Transwell小室迁移和Matrigel基质胶包被的Transwell小室侵袭实验结合鬼笔环肽染色、Western blot及G-LISA检测发现,PGC1β可通过激活Rho GTPase促进RA-FLS板状伪足及丝状伪足的形成进而促进其迁移和侵袭。应用荧光探针DCFH-DA结合流式细胞仪检测发现,RA-FLS中ROS水平显著高于非炎性关节病患者的FLS。在沉默或过表达PGC1β的同时，加入N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制ROS生成或加入过氧化氢(H2O2)促进ROS生成，发现PGC1β通过提高 ROS水平促进 RA-FLS迁移和侵袭。Western blot检测发现PGC1β可能通过上调ROS激活NF-κB信号通路发挥调控作用。最后，采用高度免疫缺陷模型NCG小鼠建立体内RA-FLS软骨侵袭模型，证实PGC1β在体内可促进RA-FLS侵袭软骨。本研究结果从临床研究、体外及体内实验的角度，全面证实PGC1β在RA滑膜炎症及关节破坏中的重要调控作用，并从免疫代谢的崭新角度进一步阐明PGC1β通过调控能量代谢促进RA-FLS活化的具体调控机制，为今后开发RA的治疗药物提供新靶点。 Activation of fibroblast-like synoviocytes(FLS)and its subsequent excessive migration and invasion cause synovitis and joint destruction in rheumatoid arthritis(RA).We previously reported that elevated transcription factor peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator(PGC)1β in RA-FLS promoted the secretion of TNF-α,IL-6,IL-8,MMP-3,MMP-13 and RANKL,and inhibited apoptosis of RA-FLS.In this study,we further found PGC-1β was expressed in the nuclei of lining synoviocytes,sublining inflammatory cells and vascular endothelial cells of RA synovium.Synovial PGC-1β was positively associated with local and systemic inflammation as well as joint destruction,which implied that PGC1β might involve in the pathogenesis of synovitis and joint destruction in RA.In vitro,PGC1β was knockdown or overexpressed by transfection of lentivirus on RA-FLS.Wound healing assay,transwell migration and invasion assays showed that PGC1β promoted the migration and invasion of RA-FLS.Western blot and G-LISA assays showed that PGC1β increased Rho GTPases activity.F-actin staining showed that PGC-1β increased flat or ruffling lamellipodia and filopodia at the leading edges of RA-FLS.Furtherly,DCFH-DA using flow cytometry showed that the mean levels of ROS in RA-FLS were higher than that in Orth.A-FLS,while PGC1β up-regulated the level of ROS in RA-FLS.Supernumerary H2O2 could reverse the inhibitory effect of PGC1β knockdown on migration and invasion of RA-FLS.On the contrary,NAC could reverse the facilitating effect of PGC1β overexpression on the aggressive ability of RA-FLS,suggesting that the regulatory role of PGC1β is,at least in part,through the ROS pathway.Western blot showed that PGC1β promoted the expression of NF-κB p65 and NF-κB p-p65.In vivo study,RA-FLS transfected with PGC1 knockdown were implanted into the flanks of NCG mice which exhibited a significant reduction of invasion into cartilage with significantly lower invasion score.This study proved the critical role of PGC1β on promoting synovitis and joint destruction in RA and clarified the mechanism of PGC1β on regulating mitochondrial oxidative phosphorylation pathway,in order to develop a new therapeutic target for RA.
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