养心通脉有效部位方对大鼠缺血心肌骨髓间充质干细胞移植的影响

项目来源

国家自然科学基金(NSFC)

项目主持人

袁肇凯

项目受资助机构

湖南中医药大学

项目编号

30772696

立项年度

2007

立项时间

未公开

项目级别

国家级

研究期限

未知 / 未知

受资助金额

29.00万元

学科

医学科学-中医学-中医诊断学

学科代码

H-H31-H3106

基金类别

面上项目

关键词

干细胞移植 ; 机理 ; 骨髓间充质干细胞 ; 心肌缺血 ; 养心通脉有效部位方 ; myocardial ischemia ; bone marrow mesenchymal stem cells ; stem cell transplantation ; active principle region of Yangxing Tongmai Formula(apr-YTF)

参与者

黄献平;胡志希;谢梦洲;毛以林;孙贵香;简维雄;莫莉;陈清华

参与机构

云南中医药大学

项目标书摘要:心肌缺血性疾病一直是临床治疗的难点,通过骨髓间充质干细胞(MSCs)移植以改善缺血心肌功能,重建梗死心肌丧失的心肌细胞虽已显示出良好的应用前景,但目前还存在着①MSCs体外诱导分化为心肌细胞的转化率较低,②MSCs移植于梗死心肌的存活率较低,③骨髓干细胞动员归巢于心肌的百分率较低等一些亟待解决的问题,而制约了缺血心肌干细胞移植的临床应用。养心通脉有效部位方是中医治疗胸痹心痛的有效名方,针对上述MSCs心肌移植的3个问题,本项目通过养心通脉有效部位方诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外心肌样细胞分化的研究,对骨髓间充质干细胞移植大鼠梗死心肌存活影响的研究,及动员骨髓干细胞归巢大鼠梗死心肌特性变化的实验研究,以探讨养心通脉有效部位方对骨髓间充质干细胞在移植梗死心肌的过程中"诱导分化"、"移植存活"、"动员归巢"等三个环节的影响,以阐明养心通脉有效部位方调控缺血心肌骨髓干细胞移植的作用靶点及其机理。

Application Abstract: o observe the effect of active principle region of Yangxing Tongmai Formula(apr-YTF)on mesenchymal stem cells(BMSCS)of ischemic myocardial transplantation The study contains the following.① The reserch of apr-YTF induced MSCs differentiated to cardiomyocyte-like cells in vitro:myocardial structural protein Desmin,muscle and cardiac myosin heavy chain MHC restricted promoter factor GATA-4 mRNA in apr-YTF group were significantly higher than the healthy group and the positive control group(5-aza group)(P<0.05);② The effect of the number of survival BMSCs on transplant of myocardial infarction in rats treated by apr-YTF:of Connexin 43(CX43)and the early development of the heart NKX2.5 gene in[apr-YTF]+BMSCs group was significantly higher than in the healthy group and the positive control group([rhG-CSF]+BMSCs group)(P<0.05);③The reserch of apr-YTF mobilization BMSCs homing to rat infarcted myocardium:The cells of CD34+and Brdu and cTn I double staining positive in apr-YTF group,markers of BMSCs in cardiac tissue was significantly higher than model group and rhG-CSF group(P<0.01).④The effect of heart blood stasis syndrom“microenvironment”on the is MSCs transplantation:Matrix metalloproteinase-2,matrix metalloproteinase-9,(MMP-2,MMP-9)higher expression and signal transduction pathway PI3K,p38-related protein changed in myocardial ischemia related with BMSCS transplantated.Conclusion:apr-YTF regulation BMSCs transplantation into ischemic myocardium by the way“differentiation”,“transplantation survival”and“mobilization”.

项目受资助省

湖南省

项目结题报告

养心通脉有效部位方对大鼠缺血心肌骨髓间充质干细胞移植的影响结题报告(全文)

  • 排序方式:
  • 4
  • /
  • 1.代谢组学与中医证候的相关性研究

    • 关键词:
    • 证候;代谢组学
    • 简维雄;袁肇凯;黄献平;郑景辉;王丽萍;胡志希;孙贵香
    • 《全国第十一次中医诊断学术年会》
    • 中国北京
    • 会议

    通过对代谢组学与中医证候整体性关系、时空性关系以及结果分析时的关系的比较,认为代谢组学与中医证候在分析问题以及解决问题的具有相同的思维。

    ...
  • 3.心血瘀阻证微环境对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响

    • 关键词:
    • 心血瘀阻证;微环境;骨髓间充质干细胞;心肌梗死/中医药疗法;细胞培养;大鼠
    • 郑景辉;李勇华;王丽萍;袁肇凯;黄献平;简维雄;孙贵香
    • 《湖南中医药大学学报》
    • 2010年
    • 09期
    • 期刊

    目的观察心血瘀阻证微环境(Heart-Blood Stagnation Syndrome Microenvirment)对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法采用全骨髓细胞体外培养技术分离大鼠MSCs,以流式细胞仪检测细胞表面标志;细胞培养基中加入心血瘀阻证大鼠坏死心肌组织和血清的方法模拟心血瘀阻证微环境;四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察心血瘀阻证微环境对MSCs增值率从而选择最大有效浓度;第4代MSCs进行体外心肌细胞诱导分化;相差显微镜、免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果鉴定心肌细胞。结果大鼠MSCs细胞表面抗原CD11b和CD45阳性细胞率小于2%,CD90阳性率达到98%以上;疫细胞化学染色显示心血瘀阻证微环境组、5-aza组和健康大鼠微环境组中Desmin和MHC呈阳性,其中心血瘀阻证微环境组表达高于其他两组,差异有统计学意义(P<0.05),空白对照组未见表达;RT-PCR结果显示心血瘀阻证微环境组、5-aza组和健康大鼠微环境组细胞肌钙蛋白(cTnI)和心脏早发育基因GATA-4 mRNA表达水平高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),心血瘀阻证微环境组显著高于5-aza组和健康大鼠微环境组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外模拟大鼠心血瘀阻证微环境能诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞。

    ...
  • 6.养心通脉有效部位方对梗死心肌细胞因子分泌、血管新生及动员MSCs归巢的影响

    • 关键词:
    • 养心通脉有效部位方;骨髓间充质干细胞;归巢;细胞因子;血管新生
    • 李勇华;郑景辉;袁肇凯;王丽萍;简维雄;黄献平
    • 《中国中医基础医学杂志》
    • 2011年
    • 05期
    • 期刊

    探讨养心通脉有效部位方(apr-YTF)对梗死心肌细胞因子分泌、血管新生及动员骨髓间充质干细胞(MSCs)归巢的影响。方法:取急性心肌梗死造模成功的SD雄性大鼠32只,随机分为apr-YTF组、香丹注射液组、重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)组和模型对照组4组,每组8只;均于造模3h后给予相应药物,连续5d。经masson’s三色染色检测心肌瘢痕组织微小血管密度,免疫组化的方法检测心肌组织中CD34+细胞、Ⅷ因子、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子受体(Flk-1)的含量表达。结果:单个高倍视野下apr-YTF组和rhG-CSF组的心肌毛细血管数较模型组显著增加(P<0.01);与模型组比较,2组的CD34+细胞、Flk-1、bFGF表达显著增加(P<0.01),2组的Ⅷ因子表达亦增加(P<0.05),apr-YTF组的VEGF表达比模型组显著增加(P<0.01),rhG-CSF组的VEGF表达较模型组亦增加(P<0.05)。结论:apr-YTF能促进Ⅷ因子、Flk-1、VEGF、bFGF的分泌,促进血管新生,促进大鼠外周血MSCs归巢于急性梗死的心肌,有利于急性梗死心肌的修复。

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  • 8.从“微环境”的角度谈微观辨证

    • 关键词:
    • 微环境;微观辨证;物质基础
    • 郑景辉;李勇华;袁肇凯;黄献平
    • 《中医杂志》
    • 2009年
    • 12期
    • 期刊

    微观辨证正式提出已20余年,但至今尚未找到证的特异性指标,认为应当从"微环境"的角度出发,借鉴"黑箱"理论,用循证医学的方法,加强证候的病理生理学及中药复方(治则治法)物质基础与作用机制的研究。这样才能动态联系地研究微观物质的变化,更符合中医整体观念、辨证论治的特点。

    ...
  • 9.骨髓间充质干细胞移植大鼠缺血心肌后GATA-4mRNA的表达

    • 关键词:
    • 心肌缺血;骨髓间充质干细胞;心肌梗死;GATA-4;大鼠
    • 黄献平;郑景辉;袁肇凯;李勇华;王丽萍;简维雄;孙贵香
    • 《湖南中医药大学学报》
    • 2011年
    • 09期
    • 期刊

    目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)移植于大鼠缺血心肌后,心脏早发育基因GATA-4 mRNA的表达。方法设模型组、假手术组和空白对照组,其中模型组采用"冠脉结扎法"建立大鼠急性心肌梗死(AMI)模型。收集从SD雄性大鼠胫骨和股骨骨髓中分离、培养、鉴定后的MSCs,密度调至3×106/100μL悬液,移植于缺血心肌边缘组织的3个位点直接注入共100μL的MSCs细胞悬液,假手术组和空白对照组均在与模型组相同注射部位的3个位点直接注入共100μL的MSCs细胞悬液,28 d后处死大鼠进行相关实验样本处理。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心肌组织中GATA-4 mRNA的表达。结果 MSCs移植模型组和假手术组的大鼠心肌中存在GATA-4 mRNA的表达;而空白组的心肌中未检出GATA-4 mRNA的表达,对其IOD值半定量分析,模型组高于假手术组和空白组,差异有统计学意义(P<0.05或<0.01)。结论 MSCs在进入缺血心肌环境后,细胞内的心肌特异转录过程被再次激活,确立了MSCs向心肌细胞分化的方向。

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  • 10.心血瘀阻证微环境的背景研究

    • 郑景辉;袁肇凯;李勇华;王丽萍;简维雄;黄献平
    • 《全国第十一次中医诊断学术年会》
    • 中国北京
    • 会议

    <正>1微环境的概念、特点及其学术趋势微环境是一种相对模糊的状态,在MeSH(Medical Subject Headings,医学主题词表)1999年首次引进Microenvironment(微环境)概念,列于Ovarian Follicle词下;是指卵泡被附粒细胞层而形成的滋养环境。2007年又将该词列于Oncostatin M词下,指促炎/抗炎细胞因子发挥作用的环境。2009年MeSH又将该词列于Stem Cell Niche词下,是指干

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