GTH杂交瘤细胞株建立及其动态细胞化学研究

项目来源

国家自然科学基金(NSFC)

项目主持人

谭建华

项目受资助机构

中国人民解放军军事科学院军事医学研究院

项目编号

30471269

立项年度

2004

立项时间

未公开

研究期限

未知 / 未知

项目级别

国家级

受资助金额

8.00万元

学科

生命科学-兽医学-基础兽医学

学科代码

C-C18-C1801

基金类别

面上项目

关键词

促性腺激素 ; 杂交瘤 ; 细胞化学 ; rat ; gonadotropic hormone cell ; neurospongioma ; mutation ; hybridoma

参与者

万忠海;李晓艳;李阳芳;李岩松;尚峭兰

参与机构

北京市神经外科研究所;吉林大学;中国人民解放军军事医学科学院

项目标书摘要:运用杂交瘤(hybridoma)技术,建立大鼠垂体促性腺激素(gonadotropic hormone GTH)细胞与大鼠脑神经胶质瘤融合的杂交瘤细胞株。利用GTH杂交瘤细胞株既能连续传代,又能合成分泌促性腺激素的特性,克隆后,模拟发情周期的环境变化,通过细胞化学(cytochemistry)方法,研究克隆细胞随着环境变化所发生的动态变化,为论证"脑垂体促性腺激素细胞动态变化假说"提供实验依据。另一方面,某些稀有但非常重要且结构十分复杂的生物活性物质,直接通过生化方法提纯会受到原材料来源的限制,利用基因工程手段获得的途径也存在重重障碍。利用杂交瘤技术有可能解决这一难题。将具有传代能力的瘤细胞与某种可合成分泌珍稀活性物质的细胞融合,制备杂交瘤,筛选克隆后,可以大量培养,加上适当的诱导剂,有可能使其在细胞培养液中大量分泌所需的珍稀活性物质。

Application Abstract: We have overviewed the hormone variety and observed carefully the vaginal smears in each stage of the rat’s oestrous cycle.The related overview and thesis have been accepted by the《PROGRESS IN VETERNARY MEDICINE》and will be published.At the same time we put the emphasis on the research on the induction of mutation of the rat neurospongioma cells’(C6 cells’)hypoxanthine-guaninephosphoribosyl transferase(HGPRT)absence.At first,we try to get the cells what we want by 8-azaguanine concentration gradient,but we fail,and repeat it besides ultraviolet irradiation and then still fail.Recently we have obtained one strain of C6 cells which can exist in 6.0μg/ml MNNG after they have lived in 500μg/ml 8-AG and can also exist in 20μg/ml 6-TG then.According to the orginal plan,wo ought to have finished the C6 cells’mutagenesis and the preparation of the hybridoma this year,but because the expeiriment was interrupted,we havn’t still got HGPRT-cells to this day,and so we have not carried out the preparation of the hybridoma yet.Now remaining still a part of research funds,we wish the reseach would continue if we are permitted to postpone.If we can prepare the GTH(gonadotropic hormone)hybridoma cell strain,we are going to provide the ideal cell model for the research on the hypothesis of the gonadotropic cell dynamic changing and will look for a new way to prepare rare bioactive compound with the hybridoma technique.

项目受资助省

北京市

项目结题报告

GTH杂交瘤细胞株建立及其动态细胞化学研究结题报告(全文)

  • 排序方式:
  • 2
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  • 1.大鼠发情周期各阶段的阴道细胞变化观察

    • 关键词:
    • 发情周期;阴道组织涂片;大鼠
    • 张森;王新;韦旭斌;谭建华
    • 《动物医学进展》
    • 2006年
    • 02期
    • 期刊

    为了比较准确的确定大鼠发情周期各个阶段,利用阴道组织涂片法,对14只6月龄雌性Wistar大鼠连续20 d进行阴道涂片,镜检,观察阴道涂片中细胞的变化规律。结果表明,在发情间期,阴道涂片以白细胞为主(84.6个±1.1个);发情前期以有核上皮细胞为主(72.4个±8.3个);在发情期,以角质化的上皮细胞为主(78个±5.4个);发情后期角质化上皮细胞、有核上皮细胞和白细胞3种细胞都有,而且比例相当。阴道涂片法能简便有效的区分大鼠发情周期的各个阶段。

    ...
  • 2.大鼠神经胶质瘤细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶缺陷株诱变实验研究

    • 关键词:
    • MNNG;8-AG;6-TG;HGPRT;C6细胞
    • 王新;张森;万忠海;李晓艳;韦旭斌;谭建华
    • 《中国畜牧兽医学会2006学术年会》
    • 中国北京
    • 会议

    本研究试图通过N-甲基-N-硝基亚硝基胍(N-methyl-N’-nitro-nitrosoguanidine,MNNG)、8-氮鸟嘌呤 (8-azaguanine,8-AG)、6-巯基鸟嘌呤(6-thioguanine,6-TG)、紫外线照射的联合作用,建立大鼠神经胶质瘤细胞(C6细胞)的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypox anthine-guaninep hosphoribosyl transferase,HGPRT)缺陷株,为建立大鼠垂体促性腺激素(gonadotropic hormone,GTH)杂交瘤细胞株做基础,但最终未能获得预期的能够被HAT(hypoxan thine-aminop terinthymidine)培养基筛选的HGPRT-缺陷株,提示C6细胞株的HGPRT基因比较稳定,本实验条件下的诱变方法难以使其突变缺失。

    ...
  • 3.淫羊藿苷对成年雌性大鼠血清中雌二醇的影响

    • 关键词:
    • 淫羊藿苷;雌二醇;雌性大鼠
    • 张森;于海峰;李晓艳;韦旭斌;谭建华
    • 《中国畜牧兽医学会2006学术年会》
    • 中国北京
    • 会议

    目的:观察淫羊藿苷(icariin ICA)对成年雌性大鼠不同发情阶段血清中雌二醇的影响,探讨淫羊藿苷促进雌性动物生殖的机理;方法:不同剂量药物组大鼠注射相应剂量的淫羊藿苷,阴道涂片法确定大鼠的发情周期,分别在大鼠的发情前期和发情期采血,用E2试剂盒测定大鼠血清中的E2含量;结果:实验表明在10mg/kg剂量时,ICA作用最强,发情前期大鼠E2的含量为54.04±3.50;发情期E2的含量为27.08±1.58;结论:ICA具有提高大鼠E2基础分泌的作用,这可能是 ICA促进雌性动物生殖能力的机制之一。

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  • 5.C6细胞HGPRT缺陷株诱变的试验研究

    • 关键词:
    • MNNG;8-AG;6-TG;HGPRT;C6细胞
    • 王新;孙书芳;谭建华;赖小平
    • 《中国畜牧兽医》
    • 2011年
    • 12期
    • 期刊

    通过N-甲基-N′-硝基亚硝基胍、8-氮鸟嘌呤、6-巯基鸟嘌呤紫外线照射的联合作用,试图建立C6细胞的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶缺陷株,为建立大鼠垂体促性腺激素杂交瘤细胞株奠定基础,但最终未能获得预期的能够被HAT培养基筛选的HGP

    ...
  • 6.淫羊藿苷对生殖系统影响研究进展

    • 张森;谭建华;伊鹏霏;韦旭斌
    • 《中兽医医药杂志》
    • 2011年
    • 03期
    • 期刊

    <正>淫羊藿为小檗科多年生草本植物淫羊藿和箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、心叶淫羊藿及朝鲜淫羊藿的干燥地上部分,又名仙灵脾,始载于《神农本草经》,其性味辛、甘、温,具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效,常用于肾阳虚之阳痿滑精、尿淋漓、筋骨痿软、风寒湿痹、肢体麻木等,是中药

    ...
  • 7.环丙沙星单克隆抗体制备、纯化及鉴定

    • 关键词:
    • 环丙沙星(CPFX);单克隆抗体;酶联免疫检测(ELISA)
    • 李岩松;周玉;万忠海;李晓艳;谭建华
    • 《中国卫生检验杂志》
    • 2008年
    • 03期
    • 期刊

    目的:制备抗环丙沙星单克隆抗体。方法:用碳二亚胺(EDC)法合成的环丙沙星-牛血清白蛋白完全抗原(CPFX-BSA)免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术筛选分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果:筛选出3株分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D10、3C6和3G7,其抗体类型分别为IgM、IgG1和IgG1。其中3C6腹水抗体纯度、抗体浓度、亲和常数分别为80.04%、3.96 g/L和1.01×108L/mol。该单抗与恩诺沙星、诺氟沙星的交叉反应率分别为125.89%、19.50%,与青霉素、卡那霉素和庆大霉素等无交叉反应。结论:该单抗可用于动物性食品中CPFX残留ELISA检测方法的建立。

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  • 8.兽药残留分析中样品前处理技术研究进展

    • 关键词:
    • 兽药残留;样品前处理;固相萃取;超临界流体萃取
    • 叶克应;谭建华
    • 《食品科技》
    • 2007年
    • 04期
    • 期刊

    综述了样品前处理所包括的提取、净化、浓缩富集和化学衍生化技术的研究进展,重点介绍了两种比较新的,特别是广泛用于兽药残留分析的样品前处理技术,固相萃取和超临界流体萃取。

    ...
  • 9.淫羊藿苷对性成熟雌性大鼠卵巢、子宫发育的影响

    • 关键词:
    • 淫羊藿苷;卵巢;子宫;性成熟雌性大鼠
    • 张森;王新;伊鹏霏;于海峰;李波;李晓艳;谭建华;韦旭斌
    • 《中兽医医药杂志》
    • 2007年
    • 02期
    • 期刊

    为了研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)的促动物生殖作用,给性成熟的雌性大鼠不同剂量的ICA,观察其对大鼠卵巢和子宫重量的影响,并通过组织切片观察其对卵泡发育和子宫发育的影响。结果表明,ICA能提高大鼠卵巢和子宫重量。ICA低剂量组、高剂量组大鼠卵巢指数均显著高于对照组(P<0.05);ICA药物组子宫指数和阴性对照组虽然没有显著差异(P>0.05),但是有升高的趋势。组织切片显示,ICA能明显促进大鼠卵泡发育。药物组有腔卵泡数量明显多于对照组;ICA对子宫有一定的影响,但效果不显著。提示ICA可以促进大鼠卵巢和子宫的发育。

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  • 10.淫羊藿苷对大鼠腺垂体细胞合成分泌GTH的影响

    • 关键词:
    • 淫羊藿苷;垂体前叶细胞;RT-PCR;大鼠
    • 张森;于海峰;李晓艳;张贺;李波;王新;段小宇;韦旭斌;谭建华
    • 《中兽医医药杂志》
    • 2007年
    • 01期
    • 期刊

    通过腺垂体细胞的原代培养技术和半定量RT-PCR技术观察淫羊藿苷对大鼠腺垂体合成分泌GTH的影响。建立了腺垂体细胞总RNA的提取、FSH和LH特异基因的PCR扩增的体系和条件,并以β-actin为内参照与FSH和LH特异基因进行多重比较。结果淫羊藿苷能提高大鼠腺垂体细胞中GTHmRNA的水平,但并非与剂量呈线形关系,中剂量组(60μl/l)时大鼠腺垂体细胞中GTHmRNA的水平最高,与低剂量组(30μl/l)和高剂量组(100μl/l)差异显著。表明淫羊藿苷不但能通过直接作用与性腺来发挥“壮阳”的作用,而且其对垂体细胞也有刺激作用。

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