丝氨酸蛋白酶被认为是参与寄生虫感染和宿主-寄生虫相互作用的重要分子。在之前的研究中,通过对旋毛虫（T.spiralis）新生幼虫cDNA差减文库进行分析,发现了一种期特异性丝氨酸蛋白酶,命名为Ts-NBLsp。本研究的目的是利用体外培养的C2C12成肌细胞模型研究Ts-NBLsp调控保姆细胞形成的能力。在本研究中,重组pcDNA3.1（+）-Ts-NBLsp被瞬时转染入小鼠C2C12细胞株。CCK-8检测结果和Ki67表达的增加表明,Ts-NBLsp促进了成肌细胞的增殖。流式细胞术分析表明,pcDNA3.1（+）-Ts-NBLsp转染成肌细胞后,阻滞在S期的细胞比例增加。在表达Ts-NBLsp的C2C12成肌细胞中,胶原蛋白Ⅰ,Ⅵ和细胞因子TNF-α,TGF-β,IL-17,VEGF,FGF2的mRNA水平明显增加。与mRNA表达的增加一致,ELISA结果表明,在Ts-NBLsp转染的成肌细胞中,胶原蛋白Ⅰ,Ⅵ和这些细胞因子的分泌也显著增加。此外,在表达Ts-NBLsp的C2C12细胞中,肌特异性蛋白desmin、MyHC、MyoD1和myogenin的表达水平降低。总之,我们的研究结果表明,Ts-NBLsp在旋毛虫感染的肌肉阶段起着调节肌生成过程和参与保姆细胞形成的作用。研究Ts-NBLsp的生物学功能,有助于阐明旋毛虫感染过程中细胞-寄生虫相互作用的复杂机制。

棘球蚴病（俗称包虫病）是由棘球属绦虫的幼虫寄生于动物（包括人）体内而引起的一类人兽共患寄生虫病,其中细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病严重阻碍着畜牧业的发展和人类身体健康,并造成巨大的经济损失。棘球蚴病的有效防治需要抗棘球蚴药物和疫苗以及其他措施的综合实施,虽然抗棘球蚴药物和疫苗作为疫病防控的重要手段已被大量研究和应用,但化学药物存在耐药性、药物残留、环境污染等问题,而疫苗因其安全、无残留、动物无休药期、符合"预防为主,治疗为辅"的方针等优点,如今得到愈来愈广泛地研究和应用,并得到了长足的发展和突破,已有的棘球蚴病疫苗包括组织细胞疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗、基因工程疫苗、转基因苜蓿疫苗、以及重组双歧杆菌疫苗等多种类型。迄今为止,仅有EG95基因工程重组抗原亚单位疫苗在国内生产上市,但现有疫苗尚存在一定的缺陷,所以研制更加有效、实用、安全的棘球蚴病疫苗还需很长的路要走。

Enterocytozoon bieneusi is an obligate intracellular pathogen that is widely detected in humans,domestic animals and wildlife,and poses a challenge to public health.Multilocus sequencing typing（MLST） tool has been used effectively in characterizations of population structures and substructures of E.bieneusi in humans and some animals.However,no population genetic analysis is available on E.bieneusi in dairy cattle.The objective of this study was to determine the E.bieneusi population in dairy cattle from different geographic locations in China.The population structure of E.bieneusi was examined by multilocus sequence typing（MLST） of 116 E.bieneusi-positive specimens（genotypes I,J,and BEB4） from dairy cattle in China using a combination of the ribosomal internal transcribed spacer（ITS） and four microsatellite and minisatellite markers.Of the 116 ITS-positive dairy cattle specimens,95,111,94 and 112 specimens were successfully amplified at MS1,MS3,MS4 and MS7 loci,respectively,generating 30,8,7 and 3 distinct types.We successfully amplified 86 specimens and sequenced at all five loci,forming 57 MLGs.These data highlight the high genetic diversity of E.bieneusi among dairy cattle.Multilocus sequence analysis revealed a strong and significant linkage disequilibrium（LD）,indicating a clonal population.This result was further supported by measurements of pairwise intergenic LD and a standardized index of association（IS A） from allelic profile data.The phylogenetic and substructural analysis found no evidence for the existence of geographically segregated sub-populations.Nevertheless,both analyses revealed the presence of three major genetically isolated groups of E.bieneusi,with sub-population 1（ITS genotypes I） and 3（ITS genotypes BEB4） had epidemic population structures,whereas sub-population 2（ITS genotypes J） had a clonal population structure.To our knowledge,this is the first large-scale population study on E.bieneusi in dairy cattle in China.The data highlight the power of MLST in understanding the epidemiology of E.bieneusi.Our results revealed the lack of geographic segregation but the existence of genetically isolated sub-populations that may be transmitted differently in dairy cattle.These data benefit to improve the current understanding E.bieneusi epidemiology in China.

宫川棘口吸虫（Echinostoma miyagawai）隶属于棘口科（Echinostmatidae）棘口属（Echinostoma）,是家禽的常见寄生虫,人体也有感染的报道。本研究以宫川棘口吸虫为研究对象,对其线粒体基因组全序列进行扩增、测序,并与棘口科其他吸虫,卡普罗尼棘口吸虫（Echinostoma caproni）、圆圃棘口吸虫（Echinostoma hortense）、似锥低颈吸虫（Hypoderaeum conoideum）的线粒体全基因组进行了比较分析。结果显示宫川棘口吸虫线粒体基因组全长14416 bp,包括了12个蛋白质编码基因（cox1-3,nad1-6,nad4L,atp6和cytb）、22个t RNA基因、2个r RNA基因和1个非编码区。比较分析发现,宫川棘口吸虫与其他3种吸虫线粒体全基因同源性为68.9-84.6%,圆圃棘口吸虫与同属的宫川棘口吸虫、卡普罗尼棘口吸虫的同源性甚至低于同科中的似锥低颈吸虫与他们的同源性。12个蛋白质编码基因核苷酸序列的同源性为60.7-88.9%,氨基酸序列的同源性为56.9-90.5%。进化分析显示,宫川棘口吸虫与其他棘口科吸虫聚在一个大分支,亲缘关系较近,但是圆圃棘口吸虫却单独地形成了一个分支。本研究为棘口科吸虫的分子分类、群体遗传和系统进化的研究提供了重要的分子标记。