超解像光照射分子不活性化法の開発

项目来源

日本学术振兴会基金(JSPS)

项目主持人

野間涼平

项目受资助机构

大阪大学

立项年度

2023

立项时间

未公开

项目编号

23KJ1492

研究期限

未知 / 未知

项目级别

国家级

受资助金额

1800000.00日元

学科

分子生物学関連

学科代码

未公开

基金类别

特別研究員奨励費

关键词

未公开

参与者

野間涼平

参与机构

未公开

项目标书摘要:Outline of Research at the Start:光照射分子不活性化法(CALI)は、光照射によって発色団を結合させた標的タンパク質を不活性化しその機能を調べる、光遺伝学手法である。従来の光学顕微鏡を用いたCALIでは、光の回折限界のため不活性化可能な領域サイズの下限は200 nm程度に留まる。しかし、細胞内のオルガネラ中の領域や1タンパク質複合体のサイズはしばしばそれ以下であり、これらの機能解析にはより高空間分解能のCALI技術が必要である。そこで本研究では、光の回折限界を超えた空間分解能を有する超解像光照射分子不活性化法(SR-CALI)を開発する。

  • 排序方式:
  • 1
  • /
  • 1.Positive-Type Reversibly Photoswitching Red Fluorescent Protein for Dual-Color Superresolution Imaging with Single Light Exposure for Off-Switching

    • 关键词:
    • fluorescence; positive-type reversibly photoswitchingfluorescentprotein; red fluorescent protein; chromophorephenolate; multipleequilibria; superresolutionimaging; nanoscopy;DISCRIMINATIVE DIMENSIONS; RESOLFT NANOSCOPY; MICROSCOPY; GENERATION;GREEN; MODULATION; KINETICS; MUTANTS
    • Ozaki-Noma, Ryohei;Wazawa, Tetsuichi;Kakizuka, Taishi;Shidara, Hisashi;Takemoto, Kiwamu;Nagai, Takeharu
    • 《ACS NANO》
    • 2025年
    • 期刊

    Positive-type reversibly photoswitching fluorescent proteins (p-rsFPs) transition to a bright on-state upon light exposure for fluorescence excitation and to a dark off-state under a different wavelength. p-rsFPs are widely used in superresolution (SR) imaging techniques, offering simplified observation procedure and enhanced biocompatibility. Although some green p-rsFPs possess adequate photoproperties for SR imaging, all red p-rsFPs (p-rsRFPs) to date exhibit suboptimal properties, limiting the color palette for multiplexed SR imaging. Here, we present a p-rsRFP, rsZACRO, with 3.0-fold brighter fluorescence, 5.3-fold faster off-switching, and 1.5-fold higher on/off contrast than rsCherry, a conventional representative p-rsRFP. Using rsZACRO with superresolution polarization demodulation/on-state polarization angle narrowing (SPoD-OnSPAN), we successfully demonstrated SR imaging in the red spectrum and dual-color SR imaging with a single light for off-switching, visualizing vimentin intermediate filaments and actin filaments at higher spatial resolution than the diffraction limit of light in a living mammalian cell.

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  • 排序方式:
  • 1
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